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筛选ATCC细胞株主要由三类方法

原载自:www.co-bioer.com[行情动态]  2018-09-13  浏览次数:352

  ATCC细胞株作为科研工作者常用的工具,主要用于生物医学研究的体外实验研究。截止目前,被ATCC、JCRB、RIKEN、DSMZ数据库收录的商用ATCC细胞株约为4000种左右。近年来,随着ATCC细胞株的广泛应用,ATCC细胞株被错误鉴定和交叉污染问题显得尤为突出。为了确保实验结果的可重复性,NIH和ATCC早年对此已发出呼吁,建议研究者对ATCC细胞株进行鉴定,以明确所使用细胞的身份。多种主流杂志也纷纷要求作者在投稿时提交ATCC细胞株鉴定报告,有些杂志甚至要求作者提供实验前、实验中和实验后等不同阶段的ATCC细胞株鉴定报告。
  筛选ATCC细胞株的方法主要有哪些?
  主要有三类方法:
  1)单克隆环法:此类方法多用于整合率低的转染方法或者需要得到单克隆ATCC细胞株的实验。其优点在于工作量小,只需将转染或者病毒载体感染后的细胞按照一定的细胞密度转移至新皿中,并使用合适的药物进行筛选,最后在克隆环的帮助下对单克隆ATCC细胞株进行挑选,并在新皿中完成扩增。缺点在于需要对细胞密度和药物浓度绘制致死曲线并选取合适的细胞密度和药物浓度进行筛选,一些细小的密度和浓度差别都会导致难以获取均一的单克隆,结果导致获取的克隆不纯,含有非整合的细胞。稳定整合的细胞在这样一类混合细胞中,很快会失去生长优势,最终导致失去稳定株。 2)96孔单克隆稀释法:此类方法同样多用于整合率低的转染方法或者需要得到单克隆ATCC细胞株以及筛选悬浮细胞稳定株的实验。其优点在于,理论上可以得到非常均一的单克隆,同时可以筛选悬浮细胞稳定株。其缺点在于,工作量比较大。
  3)逆转录病毒混合克隆制备法:此类方法适用于需要制备混合稳定株。优点在于可以在短时间内(1周)获得稳定ATCC细胞株,同时也可以随时将细胞稀释转移至新皿中获得单克隆ATCC细胞株。缺点在于需要制备逆转录病毒载体。
  ATCC细胞株需要具备在不同的时间,不同的场地以及不同的批次间生产相同质量产品的能力。在选定生产用ATCC细胞株之后,需要建立主细胞库(mater cell bank)。从主细胞库复苏后,扩增建立工作细胞库(working cell bank),工作细胞库用于生产。细胞库通常保存在液氮中,需要维持整个产品的生命周期。在构建生产用ATCC细胞株的过程中,宿主细胞和表达载体至关重要。

 

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